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当以空白试剂为参比调节仪器零点时，比色皿窗材料的吸收、内外窗面的散射以及溶剂的吸收等都被抵消，所得吸光度值完全由显色溶液中待测离了浓度所决定。此时吸光度值与试液浓度一般呈线性关系。吸光度值与测定浓度不成直线关系，发生向下弯曲(负偏离)或向上弯曲(正偏离)的现象而偏离朗伯一比尔定律的主要原因如下。
(1)非单色光的影响 紫外-可见分光光度计使用连续光源和分光器分光，不可能得到真正理想的单色光；为保证在测量中能得到充分的光强，仪器必须保持一定的狭缝宽度。由狭缝射出后投射到被测物质上的光，是一个有限宽度的谱带——光谱通带。随光谱通带宽度的增大，吸收光谱的分辨率降低，并偏离朗伯一比尔定律。
(2)非吸收光的影响 当来自出射狭缝的光的光谱通带宽度大于吸收光谱谱带时，投射在被测物质上的光就含有非吸收光。这不仅能使灵敏度降低，且能使校准曲线向横坐标轴弯曲而偏离朗伯一比尔定律。
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